利用毕赤酵母统表达重组蛋白.pdf 利用毕赤酵母系统表达重组蛋白 Protein Recombinant Productionin j’豇毋矗IpⅡsf口，由expressionsystem 博士后研究人员：于长明 博士 合作导师： 王海涛 研究员 陈薇 研究员 研究专业： 生物学 流动站名称： 军事医学科学院 生物学博士后流动站 单位名称： 军事医学科学院 微生物漉行病研究所 研究工作开始时间：二零零一年十一月 研究工作期满时间：二零零四年九月 提交报告时间：二零零四年九月 中丈摘要 利用毕赤酵母系统表达重组蛋白 (中文摘要) 毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一。该系统操控简 单、经济，表达量高，具有翻译后修饰的能力，不存在原核表达系统内毒素难以 去除的问题，也不存在哺乳动物细胞表达系统的病毒和支原体污染问题。目前已 有多种外源蛋白在该系统中成功表达。我们利用该系统表达了几种重组蛋白。 1．复合干扰素突变体 根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素突变体基因，构建了分泌型酵母 表达载体，线性化后转化GSll5。在发酵罐中进行了高密度发酵，表达量为 112m班，发酵上清经超滤、三步层析纯化获得纯度大于98％的重组蛋白，比活 性大于6×108IU／mg。 2．人干扰素一Bla 合成了人刀FN一61a基因，构建了酵母表达载体，线性化后转化GSll5。甲醇 诱导转化子，细胞病变抑制法测定诱导上清的抗病毒活性，培养上清中的表达量 为2×10’№L。 3．组织型纤溶酶原激活剂衍生物rPAm 构建了rPAm的酵母表达载体，并在毕赤酵母分泌表达，培养上清中的表达 量为1．6m∥L。 4． Thr6书DGF．BB 构建了Thr6-PDGF．BB的酵母表达载体，筛选了高表达克隆，并在发酵罐中 进行了高密度发酵，表达量为32嘶g／L。探索并优化了纯化工艺，获得纯度大于 99％的重组T11r6一PDGF。BB。 关键词 毕赤酵母，复合干扰素突变体，干扰素嵋，组织型纤溶酶原激活剂衍 生物，血小板衍生生长因子，发酵，蛋白纯化 英文摘要 ●-_h_____———_-_●__–____–________-●—————●-●●_____●________●__-__——_______________-——————————— ProteinProductionin Recombinant (A-bstfact) successml oneoftllemost exprcssion TheP七^妇卿幻r妇is foreignproteill of untilnow．no彘rS m碰pulalion，theabm哆topefom svstem economy’ease
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