单线态氧荧光探针(SOSG、ABDA、DPBF、TEMP) SOSG SOSG单线态氧荧光探针对于1O2具有高度选择性;与其它荧光或者化学发光单线态氧检测试剂不同,它对氢氧自由基(•OH)和超氧离子自由基(•O2-)无任何明显的响应。SOSG单线态氧荧光探针 发出与荧光素相似的绿色荧光,最大激发和发射波长分别约为 504/525 nm。单线态氧荧光探针不可穿透细胞。
图1.SOSG的化学结构以及与1O2相互作用时SOSG-EP的形成,导致荧光输出的激活。 ABDA ABDA是一款测定单线态氧的指示剂,具有比9,10-蒽二基-二-二丙酸更好的特性。这一水溶性的蒽衍生物与单线态氧反应,光漂白生成对应的内过氧化物,这一反应通过分光光度法记录400nm处光密度的降低来监测。荧光:λex 380 nm;λem 407 nm 在 0.1 M 磷酸盐 pH 7.0 中。 使用案例
图2.(a) ABDA与1 O 2发生1 O 2和化学反应示意图。(b) ABDA在存在5、10、20和50 mM PPET3的情况下在不同暴露时间内的吸收光谱变化。(c) ABDA在378nm处的归一化吸光度与含有不同浓度PPET3的溶液中的暴露时间的关系图。(d) 在有或没有白光照射的情况下,以一系列浓度与PPET3一起孵育的HeLa细胞的相对细胞活力。 DPBF DPBF(1,3-Diphenylisobenzofuran) 是一种单线态氧指示荧光探针,对单线态的氧(O2) 具有高特异性,可形成内过氧化物并分解成为 1,2-dibenzoylbenzene。1,3-Diphenylisobenzofuran 可以用于检测活性氧 (ROS) 的生成。一旦与单线态氧(1O2)结合,DPBF被不可逆氧化,紫外-可见光(410nm)处的吸收强度迅速降低。DPBF的激发波长是670nm。
图3.a 在DMF中照射ADCPPa后,DPBF的光分解为1 O 2(监测DPBF在415nm处的最大吸收)。b ADCPPa和亚甲蓝的线性拟合曲线比较。 TEMP TEMP(2,2,6,6-四甲基-4-哌啶酮 盐酸盐),具备稳定性捕获剂的产品特点。TEMP基线无TEMPO的干扰EPR信号,稳定性更好。同时盐酸盐结构增强了捕获剂的水溶性,避免沉淀的析出。单线态氧分子和捕获剂TEMP本身呈EPR沉默 (EPR-silent),TEMP捕获单线态氧后,可形成稳定的氮氧自由基TEMPO,通过对TEMPO的EPR信号分析并结合反应进程,可获知单线态氧的生成的速率和浓度变化。 使用案例
图4.使用光敏剂Rose Benga (1 mM) 光照后,检测单线态氧。TEMP终浓度100 mM,PBS缓冲液 (PH 7.5) 中进行检测。 备注:a.由于跃迁高度禁阻,基态氧分子吸收光不能直接产生1O2,可以通过光敏化法、微波放电法和化学方法得到。 b. PBS缓冲液可更换为纯水等其他溶剂,实验者可根据实验设计自行选择。
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