宿主软件和插件_宿主软件哪个好用

常见的载体类型汇总：质粒载体、噬菌体载体、柯斯载体、病毒载体、人工染色体载体 　　载体：在基因工程重组DNA技术中，能够携带外源基因（或DNA片段）进入细胞复制、整合或表达的工具称为载体（Vector）

载体必须具备的5个条件1、能在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制；2、具有合适的限制性核酸内切酶的酶切位点；3、具有合适的选择标记基因；4、分子量小；5、易于导入受体细胞。

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　　1.1克隆质粒载体 　　一般是指在原核细菌中，将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接，再导入（如转化或转导）细菌菌体内，质粒会在原核细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定被大量复制。克隆载体大多是高拷贝的载体，是保存基因片段一种主要手段。包括pBR322质粒及其派生质粒、pUC系列的质粒载体、T载体。 　　1.1.1万能质粒-pBR322质粒载体 　　pBR322 是最早广泛使用的大肠杆菌克隆载体之一。 1977年在加州大学旧金山分校Herbert Boyer实验室创建，以博士后Francisco Bolivar Zapata和Raymond L. Rodriguez的名字命名。 p 代表“质粒”，BR 代表“Bolivar”和“Rodriguez”。 　　pBR322 的长度为 4361 个碱基对，具有两个抗生素抗性基因——编码氨苄青霉素抗性 (AmpR) 蛋白的基因 bla 和编码四环素抗性 (TetR) 蛋白的基因 tetA。它包含 pMB1 的复制起点和编码质粒拷贝数限制因子 rop 基因。该质粒具有四十多种限制酶的单一位点。这 40 个位点中有 11 个位于 TetR 基因内。在 TetR 基因的启动子内有两个限制酶 HindIII 和 ClaI 位点。 AmpR基因内部有6个位点。tetA源自pSC101，bla源自质粒RSF2124。

　　1.1.2 乳糖不耐受的pUC19质粒载体 　　特点①分子量小，可以克隆10kb的片段②带有ampr抗性标记③拷贝数多④lacZ基因 5ʹ编码区，存在多克隆区⑤复制起始位点

　　1.1.3 pUCm-T质粒载体 　　pUCm-T质粒载体是在pUC19载体的基础上改造而成的载体，是Ø用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。克隆的原理是蓝白斑筛选重组克隆。

蓝白斑筛选蓝白斑筛选是基因工程常用的一种细菌重组子筛选方法，适用于筛选β-半乳糖苷酶缺陷型基因工程菌。pUC载体上的lacz编码的C端氨基酸序列与缺失突变的β-半乳糖苷酶形成α互补，形成4聚体，又能分解X-gal产生蓝色物质。蓝白斑筛选原理：由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下，在底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后， α互补被插入失活，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。

　　1.1.4 基因治疗好帮手-ColE1质粒载体 　　ColE1质粒载体是用做DNA免疫或基因治疗载体。特点是高拷贝、使用广泛。

　　1.2表达质粒载体 　　表达载体（Expression vector）：一般是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达件（如启动子、RBS、终止子等）构建而成，是目的基因能够表达（转录或翻译）的载体。如最常见的pET系列表达载体。质粒表达载体：质粒克隆载体＋启动子＋转录终止子＋核糖体结合位点。 　　1.2.1 原核表达载体 　　①原核表达载体的表达件主要包括启动子、转录终止子和核糖体结合位点。 　　启动子：位于转录起始点上游，并且为转录起始所必需的序列件。 　　原核表达载体启动子种类：Lac、trp、Tac、T7和IPL启动子转录终止子：基因编码区下游一段使转录终止的核苷酸序列SD序列：原核生物结构基因起始密码子上游与核糖体30S亚基识别和结合的位点，称为核糖体结合序列即SD序列。 　　②表达方式包括组成型表达、诱导型表达、融合型表达、分泌型表达。组成型表达：持续不断地表达目的蛋白。诱导型表达：在诱导物存在的情况下表达目的蛋白。融合型表达：表达载体的多克隆位点上有一个融合表达表达标签，表达的蛋白为融合蛋白。分泌型表达：在起始密码和目的基因之间加入一个信号肽，可以引导目的蛋白穿越细胞膜，分泌到细胞外。 　　表达载体可以按多种角度进行分类。 　　根据启动子强弱可以分为：强启动子载体，如pET系列载体；中等强度启动子载体，如pGEX系列载体（pGEX-6p-1、pGEX-4T-1、pMal-c2x等）；弱启动子载体，如pCANT-5E、pComb3等等。启动子的强弱很大程度上决定了表达产物的产量，以包涵体形式的表达通常选用强启动子载体。 　　表达载体还可以按照是否具有信号肽分为：分泌表达载体非分泌表达载体，不同点在于前者载体上已经含有能引导蛋白分泌的信号肽而后者没有，前者如pET22b（含有常用的pelB信号肽）。一般分泌表达载体多采用弱启动子，分泌产物多具有生物活性，不需要后续复性等操作。 　　1.3 克隆质粒载体和表达质粒载体怎么区分？如果单纯从克隆基因的角度考虑，表达载体也完全可以当做克隆载体使用而单纯的克隆载体则不一定能驱动目的基因的表达，即不能当做表达载体使用。 　　克隆载体目的在于复制足够多的含有目的基因的质粒，所以常带有较强的自我复制件，在菌体内存在多拷贝，所以抽质粒时产量会很高。但克隆载体不具备表达件。使用克隆载体时只是把你要的基因片段拿到就可以了，不需要管读码框。 　　而表达载体有复杂的构成，为的是控制目标蛋白的表达，如各种启动子（如T7、tac、lac、trp等）)，调节子（LacI）等。将目的基因克隆在表达载体上时，不但要你的目的基因连在上面，而且要表达蛋白，所以就要求你的读码框也要与载体的表达框对框，否则就不能得到你想到的表达产物。因此，是否含有表达系统件，即启动子–核糖体结合位点–克隆位点–转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。一般情况下表达载体也可以当做克隆载体使用。 　　基因工程中一般利用克隆载体实现目的基因的大量复制后，再将目的基因其转移到表达载体中实现表达，表达载体的目的是多样化的，为了实现实际工作中的需要，不同的目的就要设计不同的表达载体。 　　所以我们一般的策略是，将目的片段克隆于非常简单的克隆载体上，按照需要再亚克隆于可以满足各种要求的表达载体上。 　　1.4穿梭质粒载体 　　指含有两个亲缘关系不同的复制子，能在两种不同的生物中复制的载体。 　　例如，有些载体不仅具有细菌质粒的复制起点和选择性标记，还具有真核生物的自主复制序列和选择性标记，所以它们既能在原核生物中复制又能在真核生物中复制。通常穿梭载体有多种用法：在细菌中主要用于克隆和扩增目的基因。在酵母菌中主要用于基因表达分析。 　　2.噬菌体载体 　　噬菌体，是比细菌还小得多的微生物，和病毒侵犯真核细胞一样，它本身是一种核蛋白，核心是一段DNA，结构上有一个蛋白质外壳和尾巴，尾巴上的微丝可以把噬菌体的DNA注入细菌内。

　　2.1 温柔的λ噬菌体 　　特点：头尾结构，双链线性



　　λ噬菌体载体：主要是将外来目的DNA替代或插入其中一段序列（36-51kb）；也经常用于外 　　源目的基因的克隆。 　　分为两种类型插入型载体，有单一酶切点供外源DNA插入替换型载体，具有成对克隆位点可以被外源基因取代。

　　2.2 残暴的M13单链丝状噬菌体 　　特点丝状结构单链

　　典型的烈性噬菌体的生命周期:（a）噬菌体颗粒吸附到寄主细胞表面；（b）噬菌体DNA注入寄主细胞；（c）噬菌体DNA复制及头部蛋白质合成；（d）子代噬菌体颗粒的组装；（e）寄主细胞溶菌释放出子代噬菌体颗粒

M13单链噬菌体载体特点：以双链环形的DNA为媒介复制能转染感受态的大肠杆菌寄主细胞不存在包装限制问题可产生大量纯化的含外源片断的单链DNA分子

　　3.柯斯载体（噬菌体-质粒杂合载体） 　　柯斯载体：由质粒和λ噬菌体粘性末端“尾巴”两部分共同构建而成。特点：λ噬菌体的cos位点：使其可被包装蛋白识别包装质粒的复制起点：使其在宿主细胞中可自主复制主要用于真核细胞基因组文库的构建

　　柯斯载体的两面性：具有质粒和λ噬菌体的特性，容量高，具有与同源序列质粒进行重组的能力。

　　柯斯载体的缺点：细菌的菌落体积远大于噬菌斑，不易检测。

　　4.人工染色体载体 　　利用染色体的复制件来驱动外源DNA片段复制的载体称为人工染色体。 　　对一些大型染色体组的序列分析往往需要克隆具有数十万甚至上百万个碱基对的DNA片段，为了满足克隆大片段外源基因的需要，科研工作者构建了人造染色体载体，如酵母人工染色体克隆载体、细菌人工染色体克隆载体等。优点：装载容量大。缺点：拷贝数少，制备困难 　　4.1酵母人工染色体克隆载体 　　酵母人工染色载体(YAC)是利用酿酒酵母的染色体的复制件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。酿酒酵母的形态为扁圆形和卵形，生长的代时为90min。YAC载体的复制件是其核心组成成分，其在酵母中复制的必需件包括复制起点序列即自主复制序列、用于有丝分裂和减数分裂功能的着丝粒和两个端粒(TEL)。YAC载体的选择标记主要采用营养缺陷型基因。 　　特点：运力大，可运载长达400Kb片段， 含端粒、着丝点和 ori 等结构，构建大片段文库。 　　4.1.1 Yiplace质粒载体 　　特点：：酵母URA3标志基因；大肠杆菌的复制和报告基因；YIp载体的转化效率低，不稳定。

　　4.1.2 Yrp/Yep/Ycp载体 　　有自主复制序列ARS，遗传性不稳定。如果将ARS安装到酵母整合型载体（Yip）上，就成为Yrp。



　　YRP型载体在大肠杆菌和酵母中“穿梭”的模式 　　4.1.3 容纳“百川”的酵母人工染色体(YAC)能够克隆长达400Kb的DNA片段；含端粒、着丝点和复制起始序列构建大片段 DNA 文库，不用作常规基因克隆

　　4.2 细菌人工染色体载体(BAC) 　　由外源基因插入BAC载体组成的一个克隆体系，该系统是基于大肠杆菌F因子构建的一种超螺旋且闭环结构的高容量、低拷贝数的质粒载体。F质粒是一个约100kb的质粒，编码60多种参与复制、分配和接合过程的蛋白质。细菌人工染色体克隆载体的最大300kb容量“低拷贝”“高保真”， 常用于文库构建。

　　4.3 人工染色体表达载体 　　4.3.1 TAC – 可转移人工染色体

　　4.3.2 MAC – 哺乳动物人工染色体 　　MAC优点：装载外源DNA片段的容量大；不整合到宿主染色体上；较少发生基因沉默现象。

　　5.病毒载体 　　改造型“病毒”用于动物细胞转染，常见的慢病毒载体即HIV-1病毒改造、腺病毒载体 　　特点：高效侵染：具有极好的细胞感染能力恶行已改：经改造，无传染性，不致病动物专用：通常病毒载体主要用于动物细胞转染

　　5.1 慢病毒载体 　　慢病毒（Lentivirus）属于逆转录病毒的一种，有由于其感染潜伏期较长，临床症状发展缓慢，被称为慢病毒。而慢病毒载体则是在慢病毒的基础上改变重组其构成原件，进而在去除其生物危害性的同时，利用其高感染等性能表达目的基因。人类免疫缺陷病毒（HIV）是常见的慢病毒载体改造原型。 　　如下以HIV中最为常见的HIV-1型： 　　HIV-1为双链RNA病毒，主要组分包含三种重要病毒核心基因：gag（编码结构蛋白或称为核心蛋白），pop（编码复制相关酶类），env（编码包膜糖蛋白）；调节基因：tat（转录控制）和rev（表达调节）；四个辅助基因：vif、vpr、vpu、nef（作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染）；两端为长末端重复序列LTR (内含复制所需的顺式作用件)。 　　慢病毒载体感染能力强、且宿主广泛（分裂和非分裂细胞）；能够整合进宿主DNA且筛选后稳定遗传；表达潜伏期短，一般细胞24h-48h、体内96小时可表达；慢病毒载体可以插入组织特异性启动子或增强子；慢病毒携带基因的长度大致无5kb以内。由于慢病毒依然是HIV来源，自然宿主是人，依然存在潜在的生物毒性，故操作时避免直接接触人体。慢病毒载体适合常见类型的体外研究（细胞），包括过表达、敲除、敲低都基因干预操作，但慢病毒载体不适合于体内研究，因为其滴度不能够满足体内用量且免疫原性较强。 　　5.2 腺病毒载体 　　腺病毒（Adenovirus）是一种线性无包膜的双链DNA病毒，腺病毒的衣壳结构可以分为五邻体和六邻体两部分，腺病毒的基因组主要包括病毒DNA复制前期的Ela、Elb、E2a、E2b、E3、E4（编码病毒调节蛋白）和DNA复制后期的Ll～L5（编码病毒结构蛋白），以及两端的反向重复序列，ITRs（包装所必需的顺式作用件）。 　　腺病毒感染力强、宿主范围广（分裂和非分裂细胞），表达迅速（24h-48h）且表达量高，包装容量大，但腺病毒不能整合入宿主基因组内，规避了整合入宿主基因组的生物风险，安全的同时也形成了细胞分裂过程中不能均等分配给子细胞。腺病毒载体适合一般体外实验，使用细胞类型较多，免疫原性较强，不适合体内实验。

　　5.3 腺相关病毒 　　腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）是无包膜单链线状DNA 缺陷型病毒，外包二十面体衣壳蛋白，基因组包括两端的反向重复序列ITR（包含复制和包装所需的唯一顺式作用件），中间的两个核心基因：Rep 基因（编码参与病毒复制、包装和基因整合的蛋白），Cap（编码结构蛋白VP1、VP2、VP3）。AAV为复制缺陷病毒，不能独立存在，其复制增殖需要辅助病毒作用。衣壳蛋白不同的AAV病毒，对组织器官的亲和力不同，形成各种AAV血清型：如AAV1较易感染骨骼肌，AAV6较易感染肺部，AAV8则亲嗜肝脏，AAV9则为神经和外周组织 　　AAV载体免疫原性极低，非常适合动物实验，感染效率高，宿主范围广（分裂和不分裂细胞），不整合到基因组，稳定表达持续时间长（半年以上），但是表达水平低且慢（细胞需要1周，动物需要2周），携带目的基因片段约为2kb。 　　5.4 反转录病毒载体 　　单链RNA病毒→RNA反转录为双链DNA→整合到宿主基因组构成原病毒→原病毒转录成病毒RNA，实现复制。

　　SV40型病毒转化载体 　　SV40是猿猴空泡病毒40，哺乳动物病毒。 　　SV40为双链闭环DNA病毒，可用于构建哺乳动物表达载体

　　6.特殊用途的载体（简单罗列） 　　6.1插入或定点整合突变载体基因定点插入/基因敲除载体随机插入突变载体（T-DNA插入突变载体、转座子插入突变载体） 　　6.2 启动子探针型表达载体 　　6.3 RNAi载体转基因RNAi载体VIGS载体 　　推荐内容 　　最全的生物实验protocol与生物实验操作视频学习资料（细胞功能分析、蛋白组学、病例组化、分子生物学）112个科研软件免费版（数据处理+绘图+翻译+生物实验相关等）下载链接：https://sigusoft.com/s/34a75dd2 　　绝密！2023年国自然立项清单表可下载（生命科学部+医学科学部），附往年1000+份中标标书！ 　　如何查看国家自然科学基金的的摘要和下载结题报告？ 　　有哪些好用的zotero插件? 　　有什么适合药学/生物方向科研小白的简单易学的科研绘图工具？ 　　有没有什么很好的科研作图软件？ 　　顶级图像分析软件，Image J、Fiji、Image pro plus，一次帮你搞定！ 　　NoteExpress和EndNote相比哪一个更好用？（附安装包） 　　2023年更新！EndNote X9永久激活版本（序列号激活），最稳定，可汉化！ 　　写的太全了，Endnote 插入文献以及调整参考文献格式，这是知乎上最好的教程！ 　　太牛了！Zlibrary回归，这里有最稳定的访问指南！ 　　western blot是为了什么？ 　　如何学习和记忆细胞信号通路？ 　　最值得推荐装！GraphPad Prism 9.3 ，功能更多！ 　　SPSS 27 安装激活，授权日期到期时间2037年