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实验原理
酵母菌为真核生物，与植物、动物表达系统更为接近，也具有糖基化、二硫键形成以及蛋白质折叠翻译后加工等过程，从而使得筛选出的目的基因所编码的蛋白功能正常发挥，多重逆境抗性基因假阳性的概率大大降低。利用酵母菌，在逆境系统下，检测酵母菌表达可溶性蛋白是否可以帮助酵母菌度过逆境胁迫。通过抗性梯度实验对基因组范围内的抗性相关基因进行筛查，并对筛查的结果进行了生物信息学分析，将这些抗逆基因进行归纳、分类。
02
技术特点
· 高通量筛选：
酵母高通量抗逆基因筛选服务能够快速筛选岀非模式抗逆物种资源中的多重逆境抗性相关的大量基因，将具有非常重要的意义。
· 可溶性真核表达：
利用蛋白组学寻找候选蛋白，进行蛋白水平上的表型验证
· 敏感性酵母菌株：
YCF1/BY4741/InVSCI，是单细胞真核微生物，具有生长迅速，易于遗传操作，可分泌表达外源蛋白等特点,能对外源蛋白进行翻译后的加工和修饰，是表达外源蛋白的合适宿主。
· pYES2 载体
是为检测重组蛋白在酵母中诱导表达情况而设计的，该载体含有诱导性启动子 GAL，在半乳糖存在情况下，大量诱导外源蛋白表达，而在葡萄糖存在的情况下，抑制外源蛋白表达，且含有ura3 基因，利于对ura3 缺失体宿主菌阳性克隆的筛选。
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应用领域
耐药性： 药用生物耐药性分子机制研究等 重金属： 生物重金属修复机制研究等 抗逆性： 生物抗逆性的功能蛋白研究等
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相关案列
01
实验目的
验证目的基因A和B在酵母菌株BY4741中是否耐高温
02
实验材料
酵母菌株BY4741 PYES2-NET载体 03
实验步骤
- 目的基因构建到PYES3-NTB载体
- 目的质粒转化到酵母菌株BY4741
- 酵母菌落PCR验证
- 阳性克隆菌不同温度梯度处理
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实验结果
-
从转化的平板上随机挑取8个点，进行PCR验证。
2.从阳性菌落中随机挑取一个单菌落接种于SD-Ura液体培养基培养至OD600=1，将菌液初始浓度统一调至OD
600=0.8，然后按照10
-1、10
-2、10
-3、10
-4、10
-5进行稀释。稀释后的菌液点板到6个SG-Ura平板上，分别放置到温度为30℃、35℃、37℃、39℃、41℃、43℃培养箱中培养3天。
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实验结论
从结果图可以看出：酵母耐热性 pYES2-A>pYES2-B>pYES2。
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相关文献
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