大家好，最近实验室的BCA仪器坏了，偶然发现nanodrop也可以测蛋白浓度，省不少时间！本方法原理是：紫外吸收
友情提示：由于表格的存在，用电脑看本推文，效果更好
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紫外吸收法 |
较为灵敏50～100mg |
快速 5～10分钟 |
蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 |
各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸 |
用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正 |
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选择A280波长,测蛋白浓度
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准备工作区域，确保工作台面干净，并清洁使用的移液器和试管。
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使用纯水或缓冲液，而不是待测的蛋白质样品，进行blank校准。将一小量纯水或缓冲液（与待测样品相同的体积）放置到NanoDrop测量盖片上。
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使用无菌纸巾轻轻擦拭测量盖片以去除表面的杂质。
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将测量盖片放置到NanoDrop仪器的测量槽中，并关闭仪器盖子。
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在仪器软件中选择蛋白质浓度的测量模式。
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测量按钮开始进行blank校准，并等待一段时间直到校准完成。
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校准完成后，移除blank样品并清洁测量盖片。
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取一小量待测的蛋白质样品（通常约为1-2微升）并将其转移到新的NanoDrop测量盖片上。
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使用无菌纸巾轻轻擦拭测量盖片以去除表面的杂质。
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将测量盖片放置到NanoDrop仪器的测量槽中，并关闭仪器盖子。
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测量按钮开始测量，并等待一段时间直到测量完成。
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读取测量结果，包括吸光度值和蛋白质浓度。通常，吸光度值在280纳米波长处进行测量，该波长对应着蛋白质的最大吸收峰。
如果想更准确一些，可以加上自己的标品，测一遍标品的浓度，制作标曲。
附：
五种蛋白质测定方法比较如下：
| 方法 | 灵敏度 | 时间 | 原理 | 干扰物质 | 说明 |
| 凯氏定氮法（Kjedahl法） | 灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ±2％ | 费时 8～10小时 | 将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定 | 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） | 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 |
| 双缩脲法（Biuret法） | 灵敏度低1～20mg | 中速 20~30分钟 | 多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物 | 硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸 | 用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似；BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰 |
| 紫外吸收法 | 较为灵敏50～100mg | 快速 5～10分钟 | 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 | 各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸 | 用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正 |
| Folin－酚试剂法（Lowry法） | 灵敏度高～5mg | 慢速 40～60分钟 | 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 | 硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇 | 耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化 |
| 考马斯亮蓝法(Bradford法) | 灵敏度最高1～5mg | 快速5～15分钟 | 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm | 强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS | 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化 |
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